關(guān)于科研人員來說ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理和操作過程并不生疏，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，操作過程中夾雜著洗刷和關(guān)閉過程。但是，即使是平淡無奇的洗刷和關(guān)閉，假如操作不合理，也會(huì)很大程度上影響實(shí)驗(yàn)的度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)咱們是否能取得有意義并且的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比，布景噪音會(huì)在很大程度上影響科研人員對(duì)成果的判別。
關(guān)于如安在實(shí)驗(yàn)過程中下降ELISA試劑盒布景要素的影響，下面介紹一些過程關(guān)鍵。
洗刷很重要
洗刷過程看似很簡(jiǎn)單無聊，本來很重要，由于假如未的材料(如非特異的抗體或檢查試劑)殘留在微孔板中，就會(huì)添加布景噪音。如有必要，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會(huì)阻撓非特異反應(yīng)。假如布景過高，置疑洗刷不行，能夠測(cè)驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。
關(guān)閉更關(guān)鍵
關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占有微孔板中潛在的位點(diǎn)。這就下降了可發(fā)生信號(hào)的抗體非特異的時(shí)機(jī)。實(shí)驗(yàn)過程中到達(dá)抗體只與意圖蛋白的目標(biāo)。假如布景過高，置疑關(guān)閉不充分，能夠測(cè)驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液，或恰當(dāng)延伸關(guān)閉時(shí)刻。
假如您一直被布景疑問所困擾，那就應(yīng)當(dāng)花些時(shí)刻來優(yōu)化關(guān)閉液。這也許需求時(shí)刻，但也是值得的。目前主要有兩種類型的關(guān)閉液：蛋白和非離子型去污劑。運(yùn)用的類型須取決于多個(gè)要素，包含微孔板的外表試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢查試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)下降非特異性，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢查試劑發(fā)作相互作用。
ELISA試劑盒zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關(guān)閉液廉價(jià)、安穩(wěn)，在去除洗刷過程中的一些非特異上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用，由于很簡(jiǎn)單被洗掉。因而所有洗刷液中也有必要添加關(guān)閉液。請(qǐng)勿運(yùn)用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會(huì)下降特異，發(fā)生假陰性。另一個(gè)挑選是運(yùn)用蛋白和非離子型去污劑這兩種關(guān)閉液，后者可幫忙洗刷過程中的關(guān)閉。
蛋白關(guān)閉液則有所不一樣，是持久的。它們與敞開位點(diǎn)并關(guān)閉，ELISA試劑盒一起安穩(wěn)與微孔板的抗原分子。常用的蛋白關(guān)閉液包含牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有用攔截許多不一樣類型的分子相互作用。不過，它的缺陷在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。處理這個(gè)疑問的一種辦法是運(yùn)用雞或魚的正常血清。
抗體濃度須優(yōu)化
一般咱們會(huì)模仿“實(shí)驗(yàn)前輩”留下來的操作過程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但是假如試劑稍有不一樣，則也許需求優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體會(huì)添加布景。為了避免這一點(diǎn)，切勿運(yùn)用過多的一抗或二抗。
檢查試劑要適當(dāng)
另一點(diǎn)也很清楚明了：ELISA試劑盒切勿運(yùn)用過多的檢查試劑。假如濃度過高，或者未正確稀釋，則會(huì)致使高布景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)參加停止液。
假如ELISA遇到了高布景，那么也無需太憂慮，順次檢查ELISA體系中的組分，并掃除也許存在的疑問。盡心優(yōu)化，信任很快就會(huì)有有意義并且的實(shí)驗(yàn)成果。